目前根據實時熒光定量PCR所使用的熒光化學物質的不同，熒光定量PCR技術主要分兩類，分別是熒光染料和熒光探針。熒光染料是一種擴增序列的非特異性檢測方法，是熒光定量PCR最早使用的方法。熒光探針是基于熒光共振能量轉移（FRET）的原理建立的熒光定量PCR技術。

熒光染料

熒光染料方法也稱為DNA結合染色。DNA結合染料是熒光定量PCR最早使用的化學物質。目前主要使用的染料分子是SYBR Green Ⅰ。SYBR Green Ⅰ能與DNA雙鏈的小溝特異性地結合。游離的SYBR Green Ⅰ幾乎沒有熒光信號，但結合DNA后，它的熒光信號可成百倍增加。因此PCR擴增的產物越多，SYBR Green Ⅰ則結合得越多，熒光信號也就越強［1］，可以對任何目的基因定量。

SYBR Green Ⅰ發光的基本原理

水解探針

水解探針以TaqMan探針為代表，也稱為外切核酸酶探針。TaqMan技術是美國PE公司于1996年研究開發的一種實時熒光定量PCR技術，目前已廣泛用于基因的定量檢測［2，3］。其基本原理是利用Taq酶的5' 外切酶活性，即Taq酶具有天然的5'－3' 核酸外切酶活性，能夠裂解雙鏈DNA 5' 端的核苷酸，釋放出單個寡核苷酸。

TaqMan的基本原理

方法優缺點對比

飛朔生物甲基化產品技術原理：

未發生甲基化的胞嘧啶（C）經歷一系列轉化后，可轉變為尿嘧啶（U），經過 PCR 反應，尿嘧啶（U）最終轉化為胸腺嘧啶（T），即未甲基化胞嘧啶（C）最終將轉化為胸腺嘧啶（T）；已發生甲基化的胞嘧啶（C）由于其甲基的保護作用，在修飾反應中不會發生變化，即甲基化胞嘧啶（C）經過轉化最終仍然為胞嘧啶（C）。 

飛朔生物甲基化檢測產品采用PAP-ARMS^?技術，完成對修飾基因組的熒光定量PCR檢測，在傳統的ARMS技術原理上結合焦磷酸水解激活反應。采用 TaqMan 探針法，核酸提取-甲基化修飾-熒光PCR的實驗流程進行進行檢測。

參考文獻：

1、Proc Nat Acad Sci USA，1996，93：14509－14514.

2、Clin Chem Lab Med，1998，36：587－588.

3、Nat Genet，1993，4（3）：289－294.

——僅供科研參考使用——